Про ПЦР

ПЦР – полимеразная цепная реакция, метод молекулярной диагностики позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) или рибонуклеиновой кислоты (РНК) в биологическом материале (пробе). Таким образом, мы обнаруживаем в пробе самого возбудителя заболевания. В нашей лаборатории для определения большинства возбудителей, проводится самый точный на данный момент вид ПЦР-исследования – метод ПЦР в реальном времени. В дальнейшем, мы планируем полностью уйти от морально устаревшего и слабо застрахованного от ошибок метода электрофорезной детекции. Также мы работаем над расширением спектра проводимых ПЦР исследований.  

Правила забора проб для исследования методом ПЦР

1. Для обеспечения стерильности забора и соблюдения правил личной защиты и гигиены используют безтальковые латексные перчатки.

2. Гемолизированная, хилезная плазма и сыворотка крови в постановку не допускаются. Отбор пробы крови проводится в стерилиный шприц-контейнер типа «S-monovette» с K2EDTA или К3EDTA. Не допускается сильно оттягивать поршень для ускоренного забора крови, так как это может привести к гемолизу крови. Поршень оттягивается постепенно по мере заполнения шприца-контейнера кровью. Кровь набирают до специальной метки на шприце. После забора необходимо снять переходник с иглой, поршень обломить. Сам шприц-контейнер несколько раз аккуратно перевернуть для перемешивания крови с антикоагулянтом. Стабилизированную кровь в моновете хранят и транспортируют при t=2‑8°С.

3. Забор соскобов со слизистых оболочек (ноздри, конъюнктива, ротовая полость, прямая кишка), осуществляется с помощью стерильного урогенитального зонда. Перед отбором пробы требуется убрать все посторонние загрязнения, слизь и гной. Щеточкой зонда несколько раз проводят по слизистой оболочке, обмакивают в эппендорф с транспортной средой, полощут в ней, затем отжимают его о внутреннюю сторону горлышка эппендорфа. Урогенитальный зонд, после проведения смывов или соскобов, в эппендорфе не оставляется. Эппендорф подписывают, обязательно указывая, откуда именно взята проба – забор проб из разных мест одним зондом и/или в один эппендорф не допускается, так как для выделения возбудителя из разных зон забора пробы, требуется различная преаналитическая подготовка. Подготовленный смыв хранят и транспортируют при t=2‑8°С.

4. Материал должен отбираться от животных не ранее, чем через 21 день после иммунизации их живыми вакцинами. Смывы для ПЦР-диагностики рекомендуется проводить из тех зон, где наблюдаются симптомы заболевания, так как там наибольшая вероятность получить возбудителей в пробе. Следует помнить, что особенности течения патологических процессов для разных заболеваний различаются и появление возбудителя в крови, во многих случаях зависит от стадии заболевания и его формы.

Внимание!

ПЦР может дать ложноотрицательный результат в случае если: а) проба взята там, где нет и не может быть возбудителя; б) проводится этиотропная терапия, элиминирующая возбудитель из организма; в) в отобранную пробу попал тальк, свободный гемоглобин, спирт, формалин, другие загрязнители и химические агенты; г) в случае если врач провёл отбор нескольких смывов с разных биологических поверхностей в одну пробирку; д) неправильное хранение и транспортировка пробы. Просим врачей неукоснительно соблюдать вышеприведенные правила для выполнения нашей общей задачи.