Про ПЛР

ПЛР - полімеразна ланцюгова реакція, метод молекулярної діагностики дозволяючий домогтися значного збільшення малих концентрацій  певних фрагментів нуклеїнової кислоти (ДНК) або рибонуклеїнової кислоти (РНК) в біологічному матеріалі (пробі). Таким чином, ми виявляємо в пробі самого збудника захворювання. В нашій лабораторії для визначення більшості збудників, проводяться самий точний на даний момент вид ПЛР досліджень - метод ПЛР в реальному часі. В майбутньому, ми плануєм повністю відійти від морально застарівшого і слабо застрахованого від помилок методу електрофорезної детекції. Також ми працюємо на розширенням спектру проведених ПЛР досліджень

Правила забору проб для дослідження методом ПЛР

1, Для забеспеченості стерильності забору і дотримання правил особистого захисту та гігієни використовують безталькові латексні рукавички.

2. Гемолізована, хільозна плазма і сироватка крові в постановку не допускається. Відбір проби крові проводиться в стерильний шприц-контейнер типу «S-monovette» с K2EDTA або К3EDTA. Не допускається сильно відтягувати поршень для пришвидченого забору крові, так як це може призвести до гемолізу крові. Поршень відтягується поступово по мірі заповнення шприца-контейнера кров'ю. Кров набирають до спеціальної відмітки на шприці. Після забору необхідно зняти перехідник з голкою та обламати поршень. Сам шприц-контейнер декілька разів обережно перевернути для перемішування крові з антикоагулянтом. Стабілізовану кров в  моноветі зберігають і транспортують при t=2‑8°С. 

3. Забор зішкрібів з слизових оболонок (ніздрі, кон'юктива, ротова порожнина, пряма кишка), проводиться за допомогою стерильного урогенітально зонду. Перед відбором проб потрібно прибрати всі посторонні загрязнення (слиз, гній). Щіточкою зонду декілька разів проводять по слизовій оболонці, умочують в епіндорф з транспортним середовищем, полощуть в ній, потім віджимають його в внутрішній стороні горлечка епіндорфа. Урогенітальний зонд  після проведення змивів чи зішкрібів в епіндорфі не залишають. Епіндорф підписують, обов'язково вказують звідки точно  взята проба. Забор проб з різних місць одним зондом чи в один епіндорф не допускається, так як для виявлення збудника з різних місць забору проб потрібне різне преаналітичне підготування. Підготовлений змив зберігають і транспортують при t=2‑8°С.

4. Матеріал має відбиратися від тварин не раніше чим через 21 день після імунізації їх живими вакцинами. Змиви для ПЛР-діагностики рекомендують проводить з тих зон де спостерігають симптоми захворювання, так як там найбільша вірогідність отримати збудника в пробі. Варто пам'ятати, що особливості протікання патологічних процесів для різних захворювань відрізняються. Поява збудника в крові в багатьох випадках залежить від стадії захворювання та її форми.

Увага!

ПЛР може дати псевдонегативний результат в випадку якщо: а) проба взята там де немає і неможе бути збудника; б) проводиться етіотропна терапія емілінуюча збудника з організму; в) в відібрану пробу потрапили тальк, вільний гемоглобін,спирт, формалін та інші загрязнювачі і хімічні агенти; г) в випадку якщо лікар провів відбір декількох змивів з різних біологічних поверхней в одну пробірку; д) неправильне зберігання і транспортування проб. Просимо лікарів неухильно дотримуватимь правил виконування нашої загальної задачі.